重點實驗室
遼寧省實驗動物模型重點實驗室是遼寧省科技廳2013年設置的省重點實驗室,經過多年的建設,已建成集模式生物研發、生產和動物實驗服務三位一體的綜合性服務平臺。提供常規轉基因、常規基因敲除、條件型基因敲除和基于CAS9技術的基因編輯小鼠、倉鼠等臨床模式動物制備服務以及動物代繁代養服務等。
基因修飾動物模型
1、轉基因制作
轉基因是將外源DNA通過顯微注射的方法注射到小鼠受精卵的原核內,注射DNA整合到受精卵的基因組中,并遺傳給后代。
2、基因敲除(KO)
用大小鼠基因特異sgRNA(single-guide RNA)介導Cas9核酸酶切割DNA出現特定的DSBs( double-stranded breaks),通過NHEJ(nonhomologous end joining)修復途徑造成靶基因的Indel ( insertion/deletion),產生移碼突變(frameshift mutations)、翻譯提前終止(premature stop codon)或者片段刪除,從而實現基因敲除。成功率高達100%,且不受品系限制,可以實現多基因同時敲除。
3. 基因敲入(KI)
(1) 特定位點寡核苷酸突變
在小鼠基因組中的特定位點敲入突變,包括單個或多個堿基突變、單個或多個氨基酸突變等。
(2) 特定位點基因敲入
在小鼠基因組中的特定位點敲入異源基因,如:熒光蛋白,LacZ,Luciferase,CreERT2,LoxP-GFP-stop-LoxP-RFP等。
4. 條件性基因敲除(CKO)
條件性基因敲除是通過Cre-LoxP/FLP-Frt重組系統來實現的。在目的基因兩端各放置一個LoxP序列,得到Floxed小鼠。將Floxed小鼠與Cre小鼠交配,即可獲得目的小鼠。
5. 誘導性點突變制作
利用Cre重組酶介導的刪除和倒位,可以實現目的基因的誘導性點突變。
動物模型
小鼠品系模型 | 地鼠品系模型 | 人源腫瘤異種移植模型 |
TP53小鼠模型 | AS160地鼠模型 | 胃癌移植瘤NYG小 鼠模型 |
APOE小鼠模型 | PRKDC D140地鼠模型 | 肺癌移植瘤NYG小鼠模型 |
LDLR小鼠模型 | NOS3地鼠模型 | 肝癌移植瘤NYG小鼠模型 |
NEO小鼠模型 | PCSK9 D22地鼠模型 | 食道癌移植瘤NYG小鼠模型 |
AS160小鼠模型 | PCSK9 D380Y地鼠模行 | 胰腺癌移植瘤NYG小鼠模型 |
ACE2小鼠模型 | MIR223地鼠模型 | 結直腸癌移植瘤NYG小鼠模型 |
NYG D10-D50小鼠模型 | Leptin地鼠模型 | |
APP/PS1小鼠模型 | LDLR APOE和LDLRMUT717地鼠模型 | |
NOD SCID與NYG以及NYG D10-D50與NYG小鼠模型
|
模型制備
藥物誘導模型 | 手術誘導模型 | 轉基因模型 |
肺纖維化模型(氣管給藥) | 腦缺血再灌注模型(頸動脈結扎法) | 基因工程小鼠制備(顯微注射) |
慢性心衰模型(注射給藥) | 大腦中動脈栓塞和缺血再灌注模型(線拴法) | 模型小鼠保種(活體/胚胎冷凍) |
帕金森/癲癇模型(腦立體定位法) | 心肌梗死模型(開胸法) | 模型小鼠代養與擴繁(體外受精擴繁) |
哮喘模型(霧化法) | 坐骨神經鉗夾和離斷模型 | |
腫瘤皮下成瘤模型(皮下注射法) | 脊髓損傷模型(打擊器法) | |
腫瘤PDX模型(組織塊移植) | 腎缺血再灌注模型(腎動脈結扎法) | |
潰瘍性結腸炎模型 | 骨質疏松模型(卵巢摘除法) | |
妊娠糖尿病模型 | 肝纖維化/肝硬化模型(膽總管結扎法) | |
類風濕關節炎動物模型 | 膿毒血癥模型(盲腸結扎穿刺法) | |
糖尿病腎病模型 | 血管內皮損傷模型(球囊/導絲法) |
細胞功能學
細胞活性檢測、細胞增殖檢測、細胞凋亡檢測、細胞周期檢測、細胞自噬檢測、細胞壞死檢測、細胞焦亡檢測、細胞鐵死亡檢測、細胞遷移能力檢測、細胞劃痕檢測、細胞黏附能力檢測、細胞侵襲能力檢測、細胞免疫化學染色、細胞免疫熒光染色、細胞RNAscope實驗、細胞線粒體自噬檢測、細胞內質網應激檢測、細胞熒光原位雜交(FISH)實驗。
分子生物學
DNA提取、DNA甲基化、基因多態性檢測、轉錄因子功能及調控
RNA提取、RNA甲基化、lncRNA表達及調控、circRNA表達及調控、miRNA加尾法PCR、miRNA莖環法PCR
載體構建、病毒制備、雙熒光素酶實驗、EMSA實驗、RNA pull-down、RNA免疫共沉淀(RIP)、染色質免疫共沉淀(CHIP)
蛋白提取、蛋白修飾檢測、蛋白活性分析、免疫共沉淀
Western 雜交、Southern 雜交、Northern 雜交、定量RT-PCR檢測
病理形態
普通病理:脫鈣與軟化、標本包埋、切片、HE染色、特殊染色
分子病理:免疫組化、免疫熒光、TUNEL、原位雜交
病理圖像:切片掃描、共聚焦、拍照分析、三維重建、AI病理分析
超微病理:透射電鏡、掃描電鏡能譜、電鏡分析、免疫電鏡